血清 你了解多少?

2018-10-27 02:14:10 / 打印

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 血 清    

你了解多少?

做过细胞相关实验的科研人员们都知道, 血清是实验室细胞培养不可或缺的神器,一小瓶可贵了,一不小心还会产生沉淀,心疼肝也疼,该不会是被污染了吧?真的是任重身也娇……那么今天我们就来好好认识一下它。

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---血清是什么

血清,指血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体,或指纤维蛋白原已被除去的血浆。

血清的主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞铁壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。

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---血清的分类

主要有胎牛血清、小牛血清 、新生牛血清 、成牛血清 、兔血清 、鸡血清 、猪血清 、马血清 、其他动物血清等,实验室最常用的自然要属胎牛血清了。

不同的血清来源不同,从生命体获取的时间不同,组分与比例也有很大差异,因此用途和用法也不尽相同,实验中要根据相应的细胞实验选择对应的血清。

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---血清的存储

血清须储存于-20℃ -70℃ 的低温冰箱中。

4℃冰箱中保存的时间切勿超过1个月。

不要将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会被破坏,从而影响血清质量。

如果一次无法用完一瓶血清,可将其每40~45ml分装于无菌的50ml离心管中。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。

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---血清的解冻

血清的解冻需采用逐步解冻法

-20℃至 -70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。

移入室温,待全部溶解后再分装(一般分装于50ml无菌离心管中)。在溶解过程中须将其规则摇晃均匀(不要造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的产生。

切勿直接将血清从-20℃转入37℃解冻,这样温度改变太大,蛋白质易凝集而出现沉淀。

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---血清的热灭活

热灭活一般是指以 56℃ ,30 分钟来处理已解冻的血清,此加热步骤可以使补体去活化,而补体参与的反应有 : 溶细胞活性,平滑肌的收缩,肥大细胞和血小板组胺的释放,增强吞噬作用,淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。

培养一些表面有补体受体的细胞,血清是需要灭活的。

实验显示,对大多数的细胞而言血清是不需要热灭活的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,反而通常会因高温处理而影响了血清的质量,造成细胞生长速率的降低。

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---血清中的沉淀物以及避免方法

那么血清中的沉淀物和絮状物到底是什么呢?

主要由血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中的纤维蛋白造成,这些沉淀不会影响血清本身的质量,可以3000rpm离心5分钟去除。热灭活后有些沉淀物在显微镜下观察像"小黑点",常常让研究者误认为血清受到了污染。当然如果不放心的话可以立即更换另一批次的血清。

沉淀虽无太大影响,但没有沉淀总归更好,那么怎样避免沉淀的产生呢?前文已经提到过一些,现在我们总结一下:

(1) 解冻和分装血清时规则摇晃均匀(不要造成气泡) 

(2) 解冻血清时逐步解冻,温度跨度不要太大 

(3) 不要将血清置于37℃太久

(4) 若非必要,不要进行血清的热灭活

(5) 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

你对血清的了解是否更加深入一层了呢?

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---关于康宁 Cellgro

康宁 Cellgro 成立于1984年,是美国 FDA 注册工厂,专业生产细胞培养基、盐溶液、抗生素、各种试剂与添加剂、动物血清、分子生物用试剂等,自动装填系统使产品洁净标准达 SAL 10-3 。

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