杜仲叶提取物对黄羽肉鸡生长性能的影响及机制研究 试验报告

2018-12-12 01:26:16 / 打印

 近年来,饲料药物添加剂和化学产品添加剂在畜产品中残留,对人类健康和环境造成了不良影响,很多国家已禁用。我国在2017年也禁用喹乙醇、对氨基苯胂酸等饲料药物添加剂,说明我国全面禁用药物添加剂的日期越来越近。加之中国畜牧业的飞速发展,动物引入交叉混合感染的疾病日益增多,养殖场或养殖户又滥投药和乱投药,细菌对常用的抗微生物药物已经产生了不同程度的耐药性,用药已经很难达到理想的效果,还会对食品安全和人类健康造成威胁,同时还降低畜禽产品的品质,所以提高动物机体自身免疫力是一种有效的新途径。

中草药在我国使用已有上千年的历史,在人类的使用上已积累了丰富的知识和经验,而在畜禽较少,具有提高动物机体免疫力的作用。所以如果在畜牧业上利用好中药提高机体免疫力,是解决动物疾病特别是病毒性疾病的发展方向。并且,中草药中含有的多糖、黄酮等成分对于提高动物产品肉质有着良好的作用。1. 试验目的

本试验选用被称为“植物黄金”的杜仲叶提取物为对象,研究其作为饲料添加剂对黄羽肉鸡生长性能、养分消化率、免疫和抗氧化等功能的影响。

2. 试验材料与方法

2.1 试验材料

黄羽肉鸡:岭南黄快大型黄羽肉鸡由浙江群大饲料科技股份有限公司提供。

杜仲叶提取物:由山东龙昌动物保健品有限公司提供,其主要功能成分为绿原酸(≥5%)、黄酮类(≥8%)、多糖(≥20%)等。

2.2 试验时间

2016年6月23日至2016年08月13日共50天。

2.3 试验地点

浙江省海宁市浙江群大饲料科技股份有限公司试验场。

2.4 试验设计

2.4.1试验动物及处理

将600只1日龄健康岭南黄快大型黄羽肉鸡随机分成6组,每个组4个重复,每个重复25只。试验期为50日。对照组饲喂基础日粮,试验1组、试验2组、试验3组、试验4组、试验5组为实验组,饲喂的日粮添加不同梯度的杜仲叶提取物或抗生素,组间差异不显著(P>0.05)。具体分组及处理如表1。

表1:杜仲叶提取物对黄羽肉鸡生产性能的影响试验设计

2.4.2试验日粮组成及营养水平

基础日粮参考NRC(1994)肉鸡营养标准和中国饲料营养成分表,结合生产实际配置基础日粮,基础日粮组成及营养水平详见表2。

表2. 基础日粮组成及营养水平

  注:2.表中营养水平除消化能系根据原料组成计算而得外,其余均为实测值

2.4.3饲养管理

试验鸡20日龄前在育成舍育雏笼内饲养,20日龄后转到育成舍育成笼饲养。各试验组饲喂的日粮不同外,其它试验管理条件均相同。1日龄开食开水,之后自由采食,自由饮水,全程24小时光照,室内温度恒温38℃,之后每隔2日降低1℃直与室温等同,湿度60-70%。试验过程中死鸡计重后淘汰。9日龄颈部皮下注射0.5ml肇庆大华农生物药品有限公司产的重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株)、新久安(鸡新城疫病毒(La Sota株)、禽流感病毒(H9亚型,SS/94株)二联灭活疫苗),滴眼用易邦生物工程有限公司产的新支柱(新城疫、传染性支气管炎二联灭火苗(LaSota株+H120株))。试验期间由同专职饲养员负责饲养和记录,自由采食,按组投喂不同品种的饲料。每天勤扫猪栏,供给清洁饮水。每日观察肉鸡采食、粪便和精神状况,发现疾病及时处理。

2.4.4生长性能的测定

试验开始第0、21和50日龄,前1天20:00断料,自由供水,次日8点以重复为单位进行空腹称重,记录每个重复鸡的初始重、末重以及每栏采食量。计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和饲料转化率(F/G)。

(1)平均日增重。平均日增重(ADG)=(试验末平均体重-试验初平均体重)/试验天数

(2)平均日采食量(ADFI)记录每个重复肉鸡饲喂量和剩料量,汇总计算各个日龄段的平均日采食量。平均日采食量(ADFI)=(配料总数-所剩饲料量)/(试验天数×每组试验猪数)

(3)料重比(F/G)。根据肉鸡各个日龄段增加的体重和耗料量计算料重比。料重比(F/G)=平均日采食量/平均日增重

备注:试验期间如试验动物死亡,则立刻统计消耗的饲料和剩余的饲料,扣除死亡肉鸡所消耗的饲料,保证饲料的准确。

2.5代谢试验

饲养试验结束前一周,采用全收粪法,预试期3天,正试期4天。从每组各选体重相近8只肉鸡(公母各半),固定收粪时间在每天下午2-3点。粪样采集后立即用10% HCl按10:1比例拌匀,于-20 ℃密封,保存,70℃±1℃烘干,粉碎待测。养分的表观消化率按以下公式计算:

养分的表观消化率=(食入养分-排泄养分)/食入养分

2.6屠宰试验

饲养试验第21和50天,每组各重复选体重相近肉鸡各2只即每组共8只进行屠宰取样。宰前禁饲12小时,禁饲期间自由饮水。

(1)内脏器官的称重与解剖观察

按常规方法进行屠宰,分离肝脏(去胆囊)、心脏、肾脏、脾脏、胰脏、胸腺、法氏囊,剔除周围结缔组织,分别称重、记录,计算内脏器官指数。

(2)样品收集和保存

血清样品:用培养皿盛取屠宰血,于37℃水浴中静置,待析出血清时吸取血清,3000rpm/min离心10min,上清液分装于eppendorf 管中,置-70℃低温冰箱中保存待测。

小肠样品:将十二指肠、空肠、回肠中间段两端结扎,剪断后取出,立即浸入液氮中,然后移至-70℃低温冰箱中保存待测;取长度约1cm的十二指肠、空肠、回肠两段,用0.9% NaCl将其冲洗干净,然后平铺在滤纸上将液体吸干,浸入10% 甲醛固定液中,置4℃冰箱中保存,供普通光镜切片制作和观察用。

内容物:分别采集小肠(十二指肠、空肠、回肠)肠道内容于eppendorf 管中,并迅速置于液氮中冻存,用于测定消化道酶活。

内脏:采集肝脏组织少许,-70℃低温冰箱中保存,用于测定肝脏抗氧化指标。

2.6.1血清生化指标的测定

采取颈动脉非抗凝血10ml,室温放置30min,3000rpm离心15min制备血清,于-20°C保存备用;用非抗凝血液分离的血清样品测定生化指标。

2.6.2抗氧化指标的测定

血清、肝脏总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等指标。

2.6.3消化功能指标测定

制作十二指肠切片,光学显微镜下观察肠道形态,测量肠道绒毛高度、隐窝深度及绒隐比;采集十二指肠内容物,测定消化酶活力。

2.6.4免疫功能指标的测定

测定胸腺、脾脏、法氏囊免疫器官指数;十二指肠内容物中免疫球蛋白IgA的含量水平。

2.7数据分析

所有数据均采用SPSS(22.0)软件中GLM法,按单因子完全随机设计对各项数据进行F值方差分析,并用LSD法进行平均数间的差异显著性检验,参照采用的显著水准0.05(或0.01)作为各项结果的差异显著性判断水准。绘图采用Word 6.0(Microsoft Inc)。

3 试验结果

3.1 杜仲叶提取物对黄羽肉鸡生长性能的影响

试验期间肉鸡的健康状况良好,20日龄前各组死亡1-2只,主要由于小鸡过于拥挤踩踏致死,21-50日龄由于气温过高,热应激过大造成死亡,各组死亡1-2只组间差异不显著(P>0.05),

由表3可知,1-20日龄时,肉鸡平均日采食量各组之间差异不显著(P>0.05);300mg杜仲叶提取物组日增重显著高于对照组和抗生素组、100mg杜仲叶提取物组、200mg杜仲叶提取物组,分别高出5.22%、4.45%、4.69%和5.17%(P<0.05),但与抗生素加杜仲叶提取物组差异不显著(P>0.05)。抗生素加杜仲叶提取物组日增重显著高于对照组和抗生素组、100mg杜仲叶提取物组、200mg杜仲叶提取物组,分别高出5.03%、4.27%、4.99%(P<0.05),与300mg杜仲叶提取物组差异不显著(P>0.05);300mg杜仲叶提取物组和抗生素加杜仲叶提取物组的料重比显著低于其它组,比对照组分别降低了4.88%和5.49%(P<0.05),而其它组与对照组无显著差异(P>0.05)。

试验全程中,平均日采食量300mg杜仲叶提取物组比对照组和抗生素组分别提高了10.30%和7.05%(P<0.05),抗生素加杜仲叶提取物组的平均采食量比对照组和抗生素组分别提高了10.69%和6.5%(P<0.05),但300mg杜仲叶提取物组与抗生素加杜仲叶提取物组之间无明显差异(P>0.05),其它组之间也无明显差异(P>0.05)。300mg杜仲叶提取物组的料重比与对照组降低了4.72%(P<0.05),抗生素加杜仲叶提取物组比对照组降低了4.29%(P<0.05),并且两组之间差异不显著(P>0.05),300mg杜仲叶提取物、抗生素加杜仲叶提取物组、抗生素组之间的差异不显著(P>0.05)。

表3.杜仲叶提取物对黄羽肉鸡生产性能的影响

  注:1,2,为对照组,分别表示基础日粮组和基础日粮+抗生素组,3,4,5表示杜仲叶提取物添加水平100、200和300 mg/kg。6表示基础日粮+抗生素+100mg/kg杜仲叶提取物。同行上标不同表示差异显著(P<0.05)。

3.2杜仲叶提取物对黄羽肉鸡养分消化率的影响

由表4可知,试验前期,添加300mg杜仲叶提取物组的黄羽肉鸡对饲料的干物质、粗蛋白质、粗脂肪的表观消化率比对照组分别提高了8.25%、9.09%和9.03%(P<0.05),但与抗生素组、抗生素加杜仲叶提取物组差异不显著(P>0.05)。抗生素加杜仲叶提取物组的干物质、粗蛋白质、粗脂肪比对照组分别提高了9.26%、9.44%和9.61%(P<0.05),但与抗生素组、300mg杜仲叶提取物组差异不显著(P>0.05)。钙和总磷的表观消化率对照组跟各组之间的差异不显著(P>0.05)。

试验后期,添加300mg杜仲叶提取物组的黄羽肉鸡对饲料的干物质、粗蛋白、粗脂肪的表观消化率比对照组分别提高了10.61%、17.52%和13.98%(P<0.05),并且粗蛋白质和粗脂肪表观消化率比200mg杜仲叶提取物组提高了6.36%和7.57%(P<0.05),但与抗生素组、抗生素加杜仲叶提取物组差异不显著(P>0.05)。抗生素加杜仲叶提取物组的干物质、粗蛋白质、粗脂肪的表观消化率比对照组分别提高了10.62%、15.12%和17.29%(P<0.05),并且粗蛋白质和粗脂肪表观消化率比200mg杜仲叶提取物组提高了6.87%和6.99%(P<0.05),但与抗生素组、抗生素加杜仲叶提取物组差异不显著(P>0.05)。钙和总磷的表观消化率对照组跟各组之间的差异不不显著(P>0.05)。

表4.杜仲叶提取物对黄羽肉鸡对饲料养分的表观消化率的影响

3.3 杜仲叶提取物对黄羽肉鸡肠道功能的影响

3.3.1杜仲叶提取物对黄羽肉鸡肠道绒毛形态的影响

图1为光学显微镜下黄羽肉鸡十二指肠的绒毛形态。如图可见,与对照组十二指肠绒毛较稀疏,有断裂脱落现象。300mg杜仲叶提取物组与抗生素组绒毛排列较整齐紧密,完整性较好。

图1  杜仲叶提取物对黄羽肉鸡小肠绒毛形态的影响

3.3.2杜仲叶提取物对黄羽肉鸡十二指肠绒毛高度、隐窝深度的影响

表5为黄羽肉鸡十二指肠绒毛高度与隐窝深度。由表可知,前期与对照组相比,300mg杜仲叶提取物组肉鸡十二指肠绒毛高度提高了15.68%(P<0.05),其它组间提高不显著(P>0.05),且隐窝深度的影响也不显著(P>0.05)。后期与对照组相比,300mg杜仲叶提取物组肉鸡十二指肠绒毛高度提高了26.76%(P<0.05),抗生素组提高了21.36%(P<0.05),抗生素加杜仲叶提取物组提高了28.28%(P<0.05)。

表5. 杜仲叶提取物对黄羽肉鸡十二指肠绒毛高度、隐窩深度的影响

  注:同行上标不同表示差异显著(P<0.05)。

3.3.3杜仲叶提取物对黄羽肉鸡十二指肠消化酶活性的影响

表6为杜仲叶提取物对黄羽肉鸡十二指肠消化相关酶活性的影响。由表6可知,21日龄时,300mg杜仲取物组和抗生素组以及抗生素加杜仲叶提取物组对黄羽肉鸡十二指肠内淀粉酶、脂肪酶活力影响都不显著(P>0.05),但是对胰蛋白酶活力的影响都是显著高于基础日粮,分别提高了18.43%、29.59%和49.33%(P<0.05),但组间差异不显组(P>0.05)。

50日龄时,添加300mg杜仲叶提取物组黄羽肉鸡十二指肠内容物中相关消化酶活力均高于对照组(P<0.05),其中胰蛋白酶高63.11%、淀粉酶高49.48%、脂肪酶高24.04%,比抗生素组的胰蛋白酶和淀粉酶提高了26.03%、22.13%(P<0.05),但脂肪酶活力影响不显著(P>0.05)。而抗生素加杜仲叶提取物组的消化酶活力均高于对照组(P<0.05),其中胰蛋白酶高75.86%、淀粉酶高42.71%、脂肪酶高40.71%,比抗生素组提高,比抗生素组的胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活力分别提高了35.89%、16.60%和19.29%(P<0.05)。

  注:同行上标不同表示差异显著(P<0.05)。

3.4 杜仲叶提取物对黄羽肉鸡抗氧化指标的影响

3.4.1杜仲叶提取物对黄羽肉鸡血清抗氧化相关指标的影响

杜仲叶提取物对黄羽肉鸡血清抗氧化功能结果见表7。

前期阶段,添加300mg杜仲叶提取物组黄羽肉鸡血清中GSH-PX和T-AOC比对照组分别提高了12.30%和41.98%(P<0.05),MDA降低了23.23%(P<0.05),比抗生素组提高了12.29%和17.35%(P<0.05),MDA降低了14.11%(P<0.05)。抗生素加杜仲叶提取物组的GSH-PX和T-AOC比对照组分别提高了11.07%和21.77%(P<0.05),MDA降低了18.58%(P<0.05),GSH-PX和T-AOC比抗生素组分别提高了11.06%和21.77%(P<0.05),MDA降低了8.91%(P<0.05)。杜仲叶提取物加抗生素组和300mg杜仲叶提取物组的GSH-PX和T-AOC、MDA均差异不显著(P>0.05)。T-SOD试验组和对照组各组间差异不显著(P>0.05)。

后期阶段,添加300mg杜仲叶提取物组黄羽肉鸡血清中T-AOC和T-AOD比对照组分别提高了30.41%和9.77%(P<0.05),MDA降低了30.91%(P<0.05),T-AOC和T-SOD比抗生素组分别提高了10.31%和8.12%(P<0.05),MDA降低了12.27%(P<0.05)。抗生素加杜仲叶提取物组的T-AOC和T-SOD比对照组分别提高了41.66%和7.44%(P<0.05),MDA降低了29.23%(P<0.05),T-AOC和T-SOD比抗生素组分别提高了19.82%和4.09%(P<0.05),MDA降低了10.12%(P<0.05)。试验组与对照组的GSH-PX差异不显著(P>0.05)。

表7.杜仲叶提取物对黄羽肉鸡血清抗氧化指标的影响

注:同行上标不同表示差异显著(P<0.05)。

3.4.2杜仲叶提取物对黄羽肉鸡肝脏抗氧化相关指标的影响

杜仲叶提取物对黄羽肉鸡肝脏抗氧化功能结果见表8。

前期阶段,与对照组比较,300mg杜仲叶提取物组肝脏中GSH-PX、T-AOC、T-SOD提高了31.11%、13.72%、9.02%(P<0.05),而MDA水平降低了39%(P<0.05),与抗生素组比GSH-PX提高了29.26%(P<0.05),MDA降低了36.29%,T-AOC、T-SOD影响不显著(P>0.05)。抗生素加杜仲叶提取物组对肝脏中的GSH-PX、T-AOC、T-SOD的含量比对照组分别提高了19.20%、11.64%、24.23%(P<0.05),而MDA水平降低了35.46%(P<0.05),与抗生素组比GSH-PX、T-SOD分别提高了21.16%和12.33%(P<0.05),而MDA降低了32.59%(P<0.05),T-AOC差异不显著(P>0.05)。300mg杜仲叶提取物组和抗生素加杜仲叶提取物组间的各指标差异不显著(P>0.05)。

后期阶段,与对照组相比,300mg杜仲叶提取物组肝脏中GSH-PX、T-AOC、T-SOD提高了47.19%、32.57%、9.30%(P<0.05),而MDA水平降低了13.46%(P<0.05),与抗生素组比GSH-PX、T-AOC分别提高了14.18%和33.71(P<0.05),而T-SOD、MDA影响不显著(P>0.05)。抗生素加杜仲叶提取物组对肝脏中的GSH-PX、T-AOC、T-SOD的含量比对照组分别提高了39.46%、34.71%和7.03%(P<0.05),而MDA降低了15.83%(P<0.05),与抗生素组比GSH-PX、T-AOC分别提高了8.18%和35.86%(P<0.05),T-AOC和MDA差异不显著(P>0.05)。300mg杜仲叶提取物组和抗生素加杜仲叶提取物组间的各指标无显著差异(P>0.05)。

表8.杜仲叶提取物对黄羽肉鸡肝脏抗氧化指标的影响

注:同行上标不同表示差异显著(P<0.05)。

3.5 杜仲叶提取物对黄羽肉鸡免疫功能的影响

3.5.1杜仲叶提取物对黄羽肉鸡十二指肠中IgA含量的影响

从表8中可以看出,前期,与对照组比较,300mg杜仲叶提取物组IgA比对照组降低了12.84%(P<0.05),与抗生素组差异不显著(P>0.05),但比抗生素加杜仲叶提取物组高了11.02%(P<0.05)。而抗生素加杜仲叶提取物组比对照组降低了21.49%(P<0.05),比抗生素组降低了12.68%(P<0.05),比300mg杜仲叶提取物组降低了9.93%(P<0.05)。后期,与对照组比较,300mg杜仲叶提取物组IgA比对照组降低了9.91%(P<0.05),与抗生素组差异不显著(P>0.05),但比抗生素加杜仲叶提取物组高了6.62%(P<0.05)。而抗生素加杜仲叶提取物组比对照组降低了15.50%(P<0.05),比抗生素组降低了7.62%(P<0.05),比300mg杜仲叶提取物组降低了6.21%(P<0.05)。

表9.杜仲叶提取物对黄羽肉鸡十二指肠中IgA含量的影响

注:同行上标不同表示差异显著(P<0.05)

3.5.2杜仲叶提取物对黄羽肉鸡免疫器官指数的影响

如表10所示,杜仲叶提取物与抗生素组对21日龄肉鸡胸腺指数影响均不显著(P>0.05),抗生素组脾脏指数显著小于其它组(P<0.05),其它组间影响不显著(P>0.05)。300mg杜仲叶提取物组法氏囊指数与对照组不显著(P>0.05),而显著小于其它两组(P<0.05)。21至50日龄期,300mg杜仲叶提取物与抗生素对肉鸡胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数的影响均不显著(P>0.05)。

表10.杜仲叶提取物对黄羽肉鸡免疫器官指数的影响

注:同行上标不同表示差异显著(P<0.05)。

4结论

实验结果表明:

1)杜仲叶提取物能提高黄羽肉鸡日采食量、日增重,降低料重比,提高其生长性能。随着杜仲添加剂量的增加,其效果呈现增加趋势,其中杜仲叶提取物的最佳添加剂量为300mg/kg,可以显著提高日增重和采食量(P<0.05),尤其是在夏季高温季节,环境温度超过32摄氏度后,对于提高采食量更为明显。杜仲叶提取物(200mg/kg)与抗生素联用效果亦较好。

2)杜仲叶提取物能提高黄羽肉鸡对饲料的干物质、粗蛋白质、粗脂肪的表观消化率,提高其生长性能。

3)杜仲叶提取物可以提高黄羽肉鸡肠道功能,可以不同程度提高不同生长阶段某些消化酶的活性,维持肠道绒毛健康形态。与对照组比较,300 mg/kg杜仲叶提取物显著提高了前期和后期黄羽肉鸡十二指肠绒毛高度,明显增加了十二指肠胰蛋白酶活性,显著改善了后期的胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性。

4)杜仲叶提取物可以显著提高黄羽肉鸡血清、肝脏的抗氧化水平。与对照组比较,杜仲叶提取物添加组黄羽肉鸡的血清、肝脏中GSH-PX活力和T-AOC以及T-SOD得到显著提高(P<0.05),而丙二醛(MDA)水平显著降低(P>0.05)。杜仲叶提取物与抗生素在提高黄羽肉鸡血清、肝脏抗氧化水平方面也可能存在一定的叠加作用。

5)日粮中添加杜仲叶提取物可改善黄羽肉鸡的免疫功能。300 mg/kg杜仲叶提取物组十二指肠内容物的IgA在前期和后期分别比对照组降低了12.84%和9.91%(P<0.05)。在使用抗生素和杜仲叶提取物复配时,比对照组降低了21.49%和15.50%(P<0.05)。

综上可知,在饲粮中添加一定量杜仲叶提取物可以改善黄羽肉鸡生长性能、饲料养分表观消化率、生长性能、肠道形态、免疫功能及抗氧化水平。通过此次试验,表明在实际生产应用中,杜仲叶提取物可较高剂量(300mg/kg)添加到动物日粮单独使用,或以中低剂量(200mg/kg)与抗生素配伍使用,可以达到完全替代或部分替代抗生素的使用效果,但其在肉鸡生长发育以及其他方面发挥的作用及作用机制需进一步研究。

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